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          影響到成像效果的一個重要因素即是熒光光源
          點擊次數:6 發布時間:2022-06-27
            影響熒光顯微鏡成像的熒光因素很多,主要包括:熒光樣品的制備,熒光光源的選擇,濾片轉盤的設計,熒光濾片的組合策略(激發光濾片,發射光濾片,雙色鏡分光濾片,帶寬選擇),顯微鏡物鏡種類,顯微鏡攝像系統的選擇等問題。熒光的激發、濾光、成像、淬滅,熒光實驗的調整就是怎么才能協調好以上因素得到好的效果,其中影響到成像效果的一個重要因素即是熒光光源。
            熒光顯微鏡的常用光源通常都是白光光源:高壓汞燈,氙燈,金屬鹵素燈和led白光光源以及的led單波長光源。
            1、汞燈
            超高壓汞燈(50-200w),它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內充一定數量的汞,工作時由兩個電極間放電,引起汞蒸發,球內氣壓迅速升高,當汞完全蒸發時,可達50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使汞分子不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫外和藍紫光,足以激發各類熒光物質,因此,為熒光顯微鏡普遍采用。推薦產品:歐司朗50w,103w,200w汞燈,適用于各大廠家熒光顯微鏡;一般200小時壽命
            2、氙燈
            氙燈和汞燈做為白光源,都能提供從紫外到近紅外一系列波長的光,但它們卻有著不同的激發光譜。汞燈集中在近紫外、藍光以及綠光附近,這種在峰值的高激發能量確保產生明亮的熒光信號,但光毒性卻很強。因此,hbo用來對固定樣品或弱熒光成像。相比而言,氙燈光源的激發比較平緩,可以用于不同波長間強度的比較,例如用于鈣離子濃度測量等。氙燈的強激發在近紅外800-1000nm。
            3、金屬鹵素燈
            目前各大顯微鏡品牌廣泛使用的一種光源,它和汞燈的激發光譜很像,但它和顯微鏡以光纖相連,能散熱,壽命更長。光纖從光源連到顯微鏡上,可以大量減少光產生的熱能。金屬鹵素燈對活細胞成像的另一個優勢是內置強度設計裝置,可以容易調節激發光。也可以通過選擇直接連接獲得更好的激發效果。
            4、led白光熒光光源:這種光源的開關在毫秒間,減少樣品在光照下的暴露時間,延長壽命。另外,led光的衰減即快又,長期活細胞試驗下可大大減少光毒性。和白光相比,led僅僅在一個較窄的光譜激發,多個led波段使得led光源能為多色熒光提供應用。

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